Каковы основные этапы процесса SDS-PAGE?

Основные этапы процесса SDS-PAGE (электрофорез в додецилсульфате натрия–полиакриламидном геле): 1

1. Приготовление геля. 1 Для получения гелеобразного раствора смешивают акриламид, метиленбисакриламид, укладочный или разделяющий гель-буфер, воду и SDS. 1 Затем раствор заливают между стеклянными пластинами без образования пузырьков. 1
2. Подготовка образца. 1 Образец белка готовят путём нагрева с SDS и 2-меркаптоэтанолом до денатурации. 2 SDS сильно связывается с белком и формирует отрицательный заряд, а 2-меркаптоэтанол освобождает сульфгидрильные группы, в результате чего высвобождаются полипептидные цепи с избыточным отрицательным зарядом. 2
3. Электрофорез. 1 При подаче электрического тока отрицательно заряженные молекулы белка мигрируют к положительно заряженному электроду через гель. 2 Скорость миграции каждой молекулы белка зависит от её молекулярного размера: маленькая молекула движется быстрее, чем большая. 2
4. Окрашивание и визуализация. 2 Для окрашивания геля используют цветные красители, такие как Coomassie Brilliant Blue или этидий бромид. 2 В результате для белков образуется чёткая цветная полоса. 2
5. Анализ. 1 Проводят анализ полученного полосчатого рисунка. 1