Роль топоизомеразы в процессе репликации ДНК заключается в следующем:

• Облегчение расплетания и раскручивания молекулы ДНК. 15 Топоизомеразы, находясь перед репликативной вилкой, разрезают молекулу ДНК для этого, после чего непрерывность её восстанавливается. 1
• Снятие напряжения перед репликационной вилкой, когда нити ДНК разматываются и разделяются. 4 Временно разрывая нити ДНК, топоизомеразы снимают это напряжение, позволяя механизму репликации работать бесперебойно. 4
• Удаление сверхспиралей, возникающих в результате разматывания ДНК. 4 Это обеспечивает правильную упаковку и функциональность реплицируемых молекул ДНК. 4