Для очистки ферментов используются различные методы разделения и фракционирования белков и белковых смесей: 1
- Фракционное осаждение при изменении рН. 1
- Фракционная денатурация нагреванием (метод используется только при работе с термостабильными ферментами). 1
- Фракционное осаждение органическими растворителями (ацетоном). 1
- Фракционирование нейтральными солями (высаливание). 1
- Электрофоретические методы. 1 Они основаны на движении заряженных молекул белков в электрическом поле. 1
- Хроматографические методы. 15 К ним относятся адсорбционная, распределительная, ионообменная, аффинная хроматография и гель-хроматография (метод молекулярных сит). 1
Для определения активности ферментов используются следующие методы: 5
- Химический метод. 5 Предполагает количественное определение субстрата или продуктов с помощью химических реагентов. 5
- Спектрофотометрический метод. 5 Измерение скорости ферментативной реакции по изменению поглощения субстрата при характеристической длине волны. 5
- Манометрический метод. 5 Определение количества газа, выделяющегося в процессе реакции. 5
- Поляриметрический метод. 5 Фиксируется изменение оптического вращения. 5
- Хроматографический метод. 5 Количественное определение субстрата или продуктов с помощью различных видов хроматографии: бумажной, тонкослойной, ВЭЖХ (аминокислотный анализ и др.). 5