What are the main issues when running SDS-PAGE gels and how can they be solved?

Некоторые основные проблемы при работе с гелями SDS-PAGE и способы их решения:

• Искажение полос. www.abcam.com Возникает из-за неравномерной загрузки образцов, избыточного количества образцов, неправильного состава буфера и ионной концентрации, длительного времени работы геля или неравномерного распределения тока по гелю. www.abcam.com Чтобы решить проблему, нужно последовательно загружать образцы, избегать перегрузки лунок, внимательно контролировать время и напряжение работы геля, обеспечивать равномерное распределение буфера и тока. www.abcam.com
• Неполное разделение белков. www.abcam.com Может быть вызвано недостаточным временем работы геля, неправильной концентрацией акриламида или неправильным приготовлением буфера. www.abcam.com Чтобы улучшить разделение, нужно позволить гелю работать достаточное время, отрегулировать концентрацию акриламида в зависимости от размера белка, убедиться, что состав буфера и ионная концентрация подходят для эффективной миграции белка. www.abcam.com
• Проблемы полимеризации геля. www.abcam.com К ним относятся непараллельные полосы, утечка образцов и плохое разделение. www.abcam.com Часто возникают из-за неправильного приготовления геля. www.abcam.com Чтобы решить проблему, нужно обеспечить полную полимеризацию, бережно обращаться с лунками и регулировать концентрацию акриламида в зависимости от размера белка. www.abcam.com
• Слишком быстрое перемещение образцов. goldbio.com Может быть вызвано слишком разбавленным буфером или работой геля под очень высоким напряжением. goldbio.com Чтобы решить проблему, нужно использовать буфер с правильной концентрацией соли и работать с гелем под рекомендуемым напряжением, указанным в протоколе. blog.edvotek.com goldbio.com
• Образцы выходят из лунок до начала работы геля. goldbio.com Это может произойти из-за задержки между загрузкой образцов и применением электрического тока к гелю. goldbio.com Чтобы решить проблему, нужно загружать и запускать гель почти одновременно, стараясь минимизировать время между загрузкой первого образца и началом работы. goldbio.com