В чём заключается принцип работы сэндвич-метода при проведении твердофазного иммуноферментного анализа?

Принцип работы сэндвич-метода при проведении твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) заключается в следующем: 1

1. На поверхность твёрдой фазы прикрепляются антитела, которые распознают один из эпитопов анализируемого антигена. 1
2. После добавления образца, содержащего антиген, на поверхности твёрдой фазы образуются иммунные комплексы (ловящие антитела — антиген). 1
3. После отмывок добавляют детектирующие антитела, направленные к другому эпитопу антигена. 1 Эти антитела связаны с ферментом, в качестве которого чаще всего выступает пероксидаза хрена. 1
4. В результате образуются тройные комплексы — «сэндвичи», в которых молекула антигена оказывается «зажатой» между двумя молекулами антител к разным эпитопам. 1
5. Для визуализации этих комплексов добавляют субстрат фермента, который даёт цветную реакцию. 1 Интенсивность окрашивания регистрируется на спектрофотометре. 1
6. Интенсивность реакции пропорциональна концентрации определяемого антигена в инкубационной смеси. 1
7. Путем сравнения интенсивности окрашивания калибровочной кривой с интенсивностью окрашивания в анализируемом образце определяют концентрацию тестируемого антигена. 1

«Сэндвич»-метод может быть использован для анализа только тех антигенов, на поверхности которых существуют, по крайней мере, две пространственно удалённые антигенные детерминанты. 24