Принцип работы секвенатора MinION (нанопоровый секвенатор производства компании Oxford Nanopore Technologies) основан на измерении электрического тока при прохождении молекулы нуклеиновой кислоты (ДНК или РНК) через нанопору. 2
Процесс происходит в камере ячейки, содержащей непроводящую мембрану, в которую встроены проводящие белковые нанопоры. 12 Обе стороны мембраны омывают растворы электролитов. 1
Некоторые этапы работы:
- Пробоподготовка. 1 К концам фрагментов нуклеиновых кислот пришиваются специальные моторные белки. 12
- Попадание образца в камеру проточной ячейки. 12 Моторные белки связываются с нанопорами. 12
- Запуск прибора. 1 Между сторонами мембраны возникает разность потенциалов. 1
- Расплетение двухцепочечной нуклеиновой кислоты. 12 Под действием электрического поля и при участии молекул АТФ моторные белки расплетают двухцепочечную нуклеиновую кислоту и направляют одну из цепей в нанопору. 12
- Движение фрагмента нуклеиновой кислоты через канал. 1 Это происходит за счёт отрицательного заряда фрагмента. 12
- Движение ионов. 12 Одновременно с исследуемой молекулой под напряжением через нанопоры движутся ионы, содержащиеся в растворах электролитов. 12
- Регистрация тока. 1 Поскольку размер нуклеотидов неодинаков, величина ионного тока зависит от последовательности участка нуклеиновой кислоты, проходящего через канал в данный момент времени. 12
- Регистрация данных. 1 Первичные данные нанопорового секвенирования представляют собой совокупность скачков силы тока ионов. 1
- Распознавание нуклеотидов. 1 Это осуществляет специальное программное обеспечение. 1
После секвенирования одного фрагмента нанопора остаётся активной и может аналогично пропустить через себя множество других цепей нуклеиновых кислот. 1