Принцип действия метода Грама для дифференциации бактерий заключается в различии в биохимических свойствах их клеточной стенки. 15

Грамположительные бактерии имеют толстую клеточную стенку, состоящую из пептидогликана (50–90% клеточной оболочки). 4 При окрашивании по Граму такие бактерии прочно окрашиваются в синий цвет анилиновыми красителями, например генциановым или метиловым фиолетовым. 13

Грамотрицательные бактерии имеют более тонкий слой пептидогликана (10% клеточной оболочки). 4 При добавлении этанола кристаллический фиолетовый вымывается, и такие бактерии окрашиваются в розовый или красный цвет из-за защитного слоя, обычно сафранина или фуксина. 4

Таким образом, метод Грама позволяет классифицировать бактерии, разделяя их на две группы относительно строения их клеточной стенки. 13