В чем заключается методика флуоресцентной in situ гибридизации FISH?

Методика флуоресцентной гибридизации in situ (FISH) заключается в обнаружении и локализации определённых последовательностей ДНК на хромосомах. 14

Основные этапы методики:

1. Подготовка зонда. 1 Флуоресцентный зонд предназначен для соответствия конкретной интересующей последовательности ДНК. 1 Затем этот зонд помечают флуоресцентным красителем. 1
2. Подготовка образца. 1 ДНК в образце (например, клетках из образца крови, биопсии или срезов тканей) денатурируется, то есть нагревается для разделения двухцепочечной ДНК на одиночные нити. 1
3. Гибридизация. 1 Флуоресцентно-меченный зонд наносится на образец, где он ищет и связывается (гибридизирует) с комплементарной последовательностью ДНК в геноме. 1
4. Промывка. 1 После гибридизации образец промывают, чтобы удалить излишки зонда, не связавшиеся с целевой ДНК. 1 Этот шаг помогает уменьшить фоновый сигнал и повысить специфичность обнаружения. 1
5. Обнаружение. 1 Образец исследуют под флуоресцентным микроскопом. 1 Зонды, связавшиеся с определёнными последовательностями ДНК, будут флуоресцировать, и их местоположение можно будет визуализировать и проанализировать. 1