В чём заключается метод секвенирования по Максаму-Гилберту?

Метод секвенирования по Максаму–Гилберту основан на частичной химической модификации ДНК и последующем расщеплении остова ДНК в местах, прилегающих к модифицированным нуклеотидам. en.wikipedia.org

Суть метода: www.dia-m.ru

1. Один из концов фрагмента ДНК метят с помощью изотопа фосфора 32Р. www.dia-m.ru В последнее время вместо радиоактивной вводят флюоресцирующую метку. www.dia-m.ru
2. Препарат меченой ДНК делят на четыре порции и каждую из них обрабатывают реагентом, специфически разрушающим одно или два из четырёх оснований. www.dia-m.ru Условия реакции подбирают таким образом, чтобы на каждую молекулу ДНК приходилось лишь несколько повреждений. www.dia-m.ru
3. Разрушение идёт в два этапа: www.dia-m.ru

• Первый этап — модификация азотистого основания и последующее выщепление его. www.dia-m.ru
• Второй этап — гидролиз ДНК в местах выщепления оснований. www.dia-m.ru

1. Фрагменты, образовавшиеся во всех четырёх реакциях, подвергают электрофорезу в четырёх соседних дорожках. www.dia-m.ru
2. Затем проводят радиоавтографию, и те фрагменты, которые содержат радиоактивную метку, оставляют «отпечатки» на рентгеновской плёнке. www.dia-m.ru
3. По положению отпечатков можно определить, на каком расстоянии от меченого конца находилось разрушенное основание, а зная это основание — его положение. www.dia-m.ru Так набор полос на рентгеновской плёнке определяет нуклеотидную последовательность ДНК. www.dia-m.ru

Метод был разработан Алланом Максамом и Уолтером Гилбертом в 1976–1977 годах. en.wikipedia.org Сегодня он используется редко, поскольку требует наличия токсичных реагентов. nebula.org