Метод Саузерн-блоттинга для анализа ДНК заключается в переносе разделённых электрофорезом в агарозном геле фрагментов ДНК на мембранный фильтр и последующем обнаружении в них известной последовательности из ДНК-зонда с помощью гибридизации с ним. ru.wikipedia.org
Процесс включает несколько этапов: anatop.usmf.md
- Выделение высокомолекулярной геномной ДНК из клетки. anatop.usmf.md
- Ферментативное расщепление ДНК разными рестриктазами с образованием фрагментов разного размера. anatop.usmf.md
- Разделение рестрикционных фрагментов в агарозном геле. anatop.usmf.md
- Денатурация фрагментов ДНК щелочным раствором. anatop.usmf.md
- Нейтрализация геля буферным раствором. anatop.usmf.md
- Капиллярный перенос фрагментов на нейлоновый или нитроцеллюлозный фильтр. anatop.usmf.md
- Гибридизация с одноцепочечными радиоактивными зондами. anatop.usmf.md
- Авторадиография для выявления гибридов: исследуемая ДНК/зонд. anatop.usmf.md
Гибридизация зонда со специфическим фрагментом ДНК на мембране фильтра указывает на то, что этот фрагмент содержит последовательность ДНК, комплементарную последовательности нуклеотидов зонда. ru.wikipedia.org