В чем преимущества и недостатки различных методов детекции ДНК-продуктов?

Некоторые методы детекции ДНК-продуктов и их особенности:

• ПЦР в реальном времени. 1 Основан на детектировании сигнала флуоресценции, позволяет наблюдать процесс накопления продукта в процессе реакции. 1 Некоторые преимущества: количественный анализ специфической ДНК в широком диапазоне концентраций, сравнительный анализ нескольких типов ДНК в одной пробирке, повышение специфичности реакции. 1
• Метод гибридизации после амплификации. 2 Для детекции продуктов ПЦР после окончания реакции амплификации используют детектор флуоресценции. 2 Преимущество метода — возможность регистрировать одновременно несколько сигналов по соответствующим каналам, что повышает производительность. 2
• Метод гибридизации в процессе амплификации. 2 Позволяет учитывать результаты реакции, не открывая пробирки. 2 Регистрация результатов по уровню флуоресценции происходит с помощью специального оборудования. 2
• Электрофоретическая детекция. 2 Позволяет осуществлять только качественный анализ. 2 Некоторые недостатки: большие затраты времени на стадию детекции, невозможность автоматизации, сложность и субъективность трактовки результатов, высокий риск контаминации. 2

Среди недостатков методов детекции ДНК-продуктов также называют обилие ложноположительных и ложноотрицательных результатов. 4 Это связано с тем, что ДНК трудно удалить с поверхностей и лабораторного оборудования, а анализируемый образец может содержать химические соединения, способные влиять на активность фермента. 4