Почему важно учитывать температуру плавления праймеров при разработке ПЦР-реакции?

Учёт температуры плавления праймеров при разработке ПЦР-реакции важен по нескольким причинам:

• Обеспечение специфичности реакции. 14 Если температура отжига праймеров близка к температуре их плавления, то праймер образует двухцепочечную молекулу только при условии полной комплементарности, что обеспечивает специфичность реакции. 14
• Минимизация образования неспецифических продуктов. 15 Если температура реакционной смеси ниже температуры плавления праймеров, то возможен неспецифический отжиг праймера на матрицу и образование димеров. 5 Это может привести к получению ложноположительных результатов ПЦР. 5
• Правильный выбор температуры отжига. 1 Обычно температура отжига выбирается на 4–5 °С ниже температуры плавления праймеров. 1 Неправильный выбор может привести либо к плохому связыванию праймеров с матрицей (при завышенной температуре), либо к связыванию в неверном месте и появлению неспецифических продуктов (при заниженной температуре). 1