Почему важно проводить амплификацию ДНК в определенных температурных условиях?

Проведение амплификации ДНК в определённых температурных условиях важно по нескольким причинам:

• Обеспечение специфичности реакции. 3 Праймеры, которые используются в амплификации, имеют определённую температуру плавления, при которой образование водородных связей нестабильно. 13 Если температура системы превышает эту точку, праймер не в состоянии удерживаться на цепи ДНК и денатурирует. 3 При соблюдении оптимальных условий праймер образует двухцепочечную молекулу только при условии его полной комплементарности, что обеспечивает специфичность реакции. 3
• Контроль за процессом. 4 Каждый цикл амплификации состоит из нескольких этапов с различными температурными режимами. 4 Например, на первом этапе при 93–95 °С происходит денатурация исходной матричной ДНК. 4 На втором этапе при 50–65 °С происходит комплементарное присоединение, отжиг праймеров к соответствующим последовательностям на границе специфического участка. 4 Третий этап амплификации проводится при температуре 70–72 °С, так как это температура оптимальной активности фермента ДНК-полимеразы. 4
• Повышение эффективности. 2 Высокая температура поддерживает матрицу в денатурированном состоянии, что повышает специфичность отжига праймеров и позволяет эффективно копировать сложные молекулы. 2