Почему важно проводить амплификацию ДНК в определенных температурных условиях?

Проведение амплификации ДНК в определённых температурных условиях важно по нескольким причинам:

• Обеспечение специфичности реакции. dl.libcats.org Праймеры, которые используются в амплификации, имеют определённую температуру плавления, при которой образование водородных связей нестабильно. www.ibmc.msk.ru dl.libcats.org Если температура системы превышает эту точку, праймер не в состоянии удерживаться на цепи ДНК и денатурирует. dl.libcats.org При соблюдении оптимальных условий праймер образует двухцепочечную молекулу только при условии его полной комплементарности, что обеспечивает специфичность реакции. dl.libcats.org
• Контроль за процессом. natural-sciences.ru Каждый цикл амплификации состоит из нескольких этапов с различными температурными режимами. natural-sciences.ru Например, на первом этапе при 93–95 °С происходит денатурация исходной матричной ДНК. natural-sciences.ru На втором этапе при 50–65 °С происходит комплементарное присоединение, отжиг праймеров к соответствующим последовательностям на границе специфического участка. natural-sciences.ru Третий этап амплификации проводится при температуре 70–72 °С, так как это температура оптимальной активности фермента ДНК-полимеразы. natural-sciences.ru
• Повышение эффективности. biomolecula.ru Высокая температура поддерживает матрицу в денатурированном состоянии, что повышает специфичность отжига праймеров и позволяет эффективно копировать сложные молекулы. biomolecula.ru