После окраски препарата фуксином по методу Ожешки следует опять обработать клетки кислотами, потому что это необходимо для дифференциации кислотоустойчивых клеток и спор. 1

Споры наименее восприимчивы к красителям, поэтому первичная обработка серной кислотой нужна для разрыхления их стенок и улучшения впитывания красителя. 1 Затем уже можно окрашивать клетки и дифференцировать кислотоустойчивые, как в методе Циля — Нильсена. 1

Таким образом, первая серная кислота нужна для разрыхления, а вторая — для дифференцировки: кислотоустойчивые клетки и споры окрашиваются в красный цвет, а некислотоустойчивые — в синий (дополнительный краситель). 13