Каковы преимущества и недостатки различных методов молекулярного клонирования?

Некоторые методы молекулярного клонирования и их преимущества и недостатки:

• Традиционное клонирование. 1 Преимущества: бюджетный, универсальный метод, удобный для направленного клонирования. 1 Недостатки: возможны ограничения, связанные с наличием сайта рестрикции. 1
• ПЦР-клонирование. 1 Преимущества: высокая эффективность трансфекции, быстрый протокол. 1 Недостатки: ограниченный выбор векторов, высокая стоимость, отсутствие контроля последовательности на стыке, сложности с реализацией направленного клонирования и клонированием нескольких фрагментов. 1
• Бесшовное клонирование. 1 Преимущества: не зависит от нуклеотидной последовательности вставки, быстрая сборка мультифрагментных конструкций, совершенный контроль направленности сборки. 1 Недостатки: высокая стоимость, необходимость подбирать и заказывать уникальные праймеры для синтеза вставки. 1
• Безлигазное клонирование. 1 Преимущества: бюджетный метод, совместим с большим выбором векторов. 1 Недостатки: сиквенс-зависимый метод клонирования. 1
• Рекомбинантное клонирование. 1 Преимущества: быстрый протокол клонирования, высокая эффективность, универсальность, воспроизводимость результатов. 1 Недостатки: высокая стоимость, необходимость приобретать патентованные смеси ферментов. 1
• TA-клонирование. 2 Преимущества: простота и скорость получения рекомбинантной ДНК, подходит для клонирования в случае наличия внутреннего сайта рестрикции во вставке ДНК. 2 Недостатки: целевая последовательность может быть вставлена в вектор как в прямой, так и в обратной ориентации, необходимость использования специализированных плазмид, несущих остаток тимина. 2

Каждый из методов молекулярного клонирования имеет свои особенности и находит применение в исследованиях и биотехнологии. 2