Некоторые методы выделения ДНК из клеток:
- Фенол-хлороформный метод. 3 Клеточный лизат или гомогенат тканей обрабатывают фенолом, хлороформом и изоамиловым спиртом в пропорции 25:24:1. 3 Фенол нужен для денатурации белков, включая нуклеазы, хлороформ растворяет жиры, а изоамиловый спирт уменьшает пенообразование и защищает хлороформ от окисления. 3 Полученный двухфазный раствор интенсивно перемешивают, а затем центрифугируют для разделения фаз. 3 В нижнюю (органическую) фазу попадают липиды и жирные кислоты, на границе раздела фаз оседают белки, а в верхней (водной) фазе остаются нуклеиновые кислоты. 3
- Метод с диоксидом кремния (силикой). 4 К образцам добавляют гуанидинтиоцианат, соединения денатурируют, молекулы связывают с силикой, после чего происходит промывка, позволяющая избавиться от других компонентов. 4 В последующем молекула превращается в раствор, пригодный для проведения исследований. 4
- Метод с ионообменными смолами. 4 Исследуемый биоматериал помещается в пробирку со смолой, закипающей под действием высоких температур. 4 После центрифугирования материал помещается на инкубацию в течение 30–40 минут. 4
- Метод с целлюлозными фильтрами. 4 Специальная бумага, пропитанная веществами-буферами, связывает нуклеиновые кислоты, денатурирует белки и защищает образцы от ультрафиолета и нуклеаз. 4
- Метод с магнитными частицами. 4 К исследуемому материалу добавляют магнитные шарики и особое лизирующее средство. 4 Шарики «захватывают» выделившуюся ДНК, остаточные клеточные элементы вымываются в процессе очищения. 4
- Метод с фильтрационными гелями. 4 Фильтрационные гели сформированы из поперечно расположенных гранул, напоминающих сито. 4 При пропуске образцов через колонку с гелем вещества разделяются и проходят очистку этилом или фенол хлороформным средством. 4
Выбор метода зависит от качества материалов, количества времени, отведённого на анализы, цели экспертизы, объёма задач, ожидаемых результатов и дальнейшего применения полученных молекул. 4