Некоторые методы искусственного получения плазмид в лабораторных условиях:
- Щелочной лизис. 1 Для лизиса бактериальных клеток используют высокую концентрацию основного раствора, например гидроксида натрия. 1 В щелочных условиях (рН 12,0–12,5) денатурируются хромосомная ДНК и белок, а плазмидная ДНК остаётся стабильной. 1
- Механический лизис. 1 Для разрушения бактериальных клеток и высвобождения плазмидной ДНК применяют физическую силу: измельчение или воздействие ультразвуком. 1
- Ферментативный лизис. 1 Для расщепления клеточной стенки и высвобождения плазмидной ДНК используют ферменты, например лизоцим. 1 Его добавляют к бактериальной культуре, затем нагревают и/или встряхивают культуру. 1
- Очистка ДНК на колонках с фильтрами. 3 ДНК обратимо сорбируется на поверхность стеклянной мембраны в растворе с высокой концентрацией хаотропной соли, примеси отмывают хаотропной солью и 70% этанолом. 3 Затем очищенная ДНК элюируется в буфере с низкой ионной силой. 3
Также для получения плазмид в лабораторных условиях используют методы высокопроцессивного клонирования, например, технологию Golgen Gate. 4