Темнопольный микроскоп использует следующие особенности освещения для формирования изображения:

• Освещение объектов косыми лучами света. 1 Лучи не попадают в объектив и остаются невидимыми для глаза, поэтому поле зрения выглядит совершенно чёрным. 1
• Применение специального темнопольного конденсора. 1 Он имеет затемнённую среднюю часть, поэтому центральные лучи света, идущие от зеркала, задерживаются, а в плоскость препарата попадают только боковые лучи, отражённые от зеркальных поверхностей, расположенных внутри конденсора. 1
• Освещение световым конусом с апертурой больше, чем апертура объектива. 4 Благодаря этому в объектив попадает только рассеянный образцом свет. 4

Увеличенная картинка показывается на полностью чёрном фоне в виде светлых участков структур. 4