Некоторые ограничения метода тёмнопольной микроскопии в плане разрешающей способности:

• Апертура объективов, работающих по методу тёмнопольной микроскопии, существенно ниже светлопольных. 1 Это связано с тем, что апертура объектива не должна перекрывать затемнённую часть апертуры конденсора. 1
• Максимальное значение апертуры объектива для работы по методу тёмнопольной микроскопии может составлять 1,2, а зачастую и того меньше — 0,8. 2 Для сравнения, этот же показатель у светопольного объектива может достигать 1,45. 2
• Нельзя использовать толстые предметные стёкла. 2 При большой толщине предметного стекла невозможно получить правильное освещение образца, так как фокус конденсора смещается с препарата внутрь стекла. 2
• Метод позволяет увидеть только контуры объекта, но не даёт возможности изучить его внутреннюю структуру. 5