Какие ограничения имеет световой микроскоп в исследовании живых клеток?

Некоторые ограничения светового микроскопа при исследовании живых клеток:

• Ограничение по размеру объекта. foxford.ru Длина волны света накладывает запрет на изучение объектов, которые существенно меньше длины волны. foxford.ru Например, при использовании белого света разрешение светового микроскопа составляет порядка 0,5 мкм. foxford.ru
• Трудность с визуализацией мелких структур. profil.adu.by Даже при использовании самого коротковолнового видимого света (фиолетового) разрешение светового микроскопа составляет около 200 нм. profil.adu.by При такой разрешающей способности видны только самые крупные компоненты клеток — ядро, пластиды, вакуоли, митохондрии, клеточные стенки. profil.adu.by
• Необходимость поддержания постоянного расстояния между живыми клетками и передней частью объектива микроскопа. www.photonics.com Даже небольшое смещение (0,25–0,5 мкм) может привести к тому, что образец окажется полностью не в фокусе и данные будут бесполезны. www.photonics.com
• Влияние красителей. profil.adu.by Большинство красителей, которые используют для окрашивания клеток, токсично для них и вызывает гибель. profil.adu.by Для живых клеток применяют только прижизненные красители, которые не токсичны. profil.adu.by
• Влияние теплового дрейфа. www.photonics.com Сосуд для образцов, среда для погружения и отбора проб, а также сами ячейки подвержены тепловому расширению или сжатию при изменении температуры окружающей среды на доли градуса. www.photonics.com