Некоторые методы, которые используются для создания генетически модифицированных организмов:
- Получение изолированных генов. 2 Для этого применяют ферменты рестрикции, которые способны разрезать молекулу ДНК в строго определённых нуклеотидных последовательностях. 2
- Создание рекомбинантных молекул ДНК. 4 Их составляют из фрагментов молекул ДНК, полученных от разных организмов. 4
- Клонирование генов или генетических структур. 4 Если модификации подвергаются одноклеточные организмы или культуры клеток многоклеточных, то на этом этапе начинается клонирование, то есть отбор тех организмов и их потомков (клонов), которые подверглись модификации. 1
- Внедрение гена в вектор для переноса в организм. 4 Для этого используют ферменты — рестриктазы и лигазы. 1 С помощью рестриктаз ген и вектор разрезают на кусочки, а лигаз — «склеивают», соединяют в иной комбинации, конструируя новый ген или заключая его в вектор. 1
- Перенос вектора с геном в модифицируемый организм. 4 Для этого используют, например, почвенную бактерию Agrobacterium tumefaciens или генную пушку. 1
- Отбор генетически модифицированных организмов. 4 Если нужно получить многоклеточные организмы, то клетки с изменённым генотипом используют для вегетативного размножения растений или вводят в бластоцисты суррогатной матери, когда речь идёт о животных. 1 В результате рождаются детёныши с изменённым или неизменным генотипом, среди которых отбирают и скрещивают между собой только те, которые проявляют ожидаемые изменения. 1