Для получения рекомбинантной амилазы в бактериях используют, например, следующие методы:
- Плазмидная экспрессия гена. 1 Ген синтезируют из олигонуклеотидов и клонируют в составе вектора под контролем промотора бактериофага. 1 Затем ген экспрессируют в клетках штамма, в результате чего получают рекомбинантный белок. 1
- Интеграция гена в хромосомную ДНК. 3 Копии кассеты, содержащей ген амилазы под контролем нативного промотора и ген селективного маркера, интегрируют в случайные участки хромосомной ДНК штамма с помощью гомологичной рекомбинации. 3
- Селекция на устойчивость к антибиотикам. 2 Такой подход используют, чтобы получить мутации, изменяющие секрецию ферментов. 2
- Введение векторов с сильными промоторами. 2 Это позволяет повысить продуктивность рекомбинантных микроорганизмов. 2
Для очистки рекомбинантной амилазы применяют ультрафильтрацию, осаждение солями, диализ и колоночную хроматографию. 4