Какие методы используются для изучения и модификации белков в ходе направленного мутагенеза?

Для изучения и модификации белков в ходе направленного мутагенеза используются различные методы, среди них:

• Сайт-специфический мутагенез. www.bibliofond.ru Ген интересующего белка клонируют и встраивают в подходящий генетический носитель. www.bibliofond.ru Затем синтезируют олигонуклеотидную затравку с желаемой мутацией. www.bibliofond.ru Эта затравка используется полимеразами для начала синтеза комплементарной копии вектора, которую затем отделяют от оригинала и используют для контролируемого синтеза мутантного белка. www.bibliofond.ru
• Расщепление цепи. www.bibliofond.ru Подлежащий изменению сайт удаляют и замещают синтетическим аналогом с желаемой последовательностью нуклеотидов. www.bibliofond.ru
• Использование ПЦР и перекрывающихся праймеров. molpit.org С их помощью вводят точечные мутации, получают вставки и делеции. molpit.org
• Введение нескольких мутаций с использованием ПЦР и метил-чувствительной рестриктазы DpnI. molpit.org
• Использование мегапраймеров. molpit.org Сначала синтезируют мегапраймер, который после повышения температуры отжига используют в ПЦР с праймером или сами по себе. molpit.org
• Кассетный мутагенез. molpit.org В белки вводят неприродные аналоги аминокислот. molpit.org
• ДНК-перетасовки. ru.wikipedia.org ru.ruwiki.ru Этот метод смешивает и выявляет части удачных вариантов для получения лучших результатов. ru.wikipedia.org Он имитирует рекомбинации, которые происходят естественно во время полового размножения. ru.wikipedia.org
• Фаговый дисплей. molpit.org Метод отбора белков при их направленной эволюции. molpit.org