Какие методы используются для изучения и модификации белков в ходе направленного мутагенеза?

Для изучения и модификации белков в ходе направленного мутагенеза используются различные методы, среди них:

• Сайт-специфический мутагенез. 3 Ген интересующего белка клонируют и встраивают в подходящий генетический носитель. 3 Затем синтезируют олигонуклеотидную затравку с желаемой мутацией. 3 Эта затравка используется полимеразами для начала синтеза комплементарной копии вектора, которую затем отделяют от оригинала и используют для контролируемого синтеза мутантного белка. 3
• Расщепление цепи. 3 Подлежащий изменению сайт удаляют и замещают синтетическим аналогом с желаемой последовательностью нуклеотидов. 3
• Использование ПЦР и перекрывающихся праймеров. 5 С их помощью вводят точечные мутации, получают вставки и делеции. 5
• Введение нескольких мутаций с использованием ПЦР и метил-чувствительной рестриктазы DpnI. 5
• Использование мегапраймеров. 5 Сначала синтезируют мегапраймер, который после повышения температуры отжига используют в ПЦР с праймером или сами по себе. 5
• Кассетный мутагенез. 5 В белки вводят неприродные аналоги аминокислот. 5
• ДНК-перетасовки. 12 Этот метод смешивает и выявляет части удачных вариантов для получения лучших результатов. 1 Он имитирует рекомбинации, которые происходят естественно во время полового размножения. 1
• Фаговый дисплей. 5 Метод отбора белков при их направленной эволюции. 5