Как работают современные методы секвенирования ДНК?

Современные методы секвенирования ДНК работают по общей схеме: elearning.volgmed.ru

1. Создание библиотеки случайных последовательностей ДНК. elearning.volgmed.ru Их можно будет сшить с общедоступными адаптерными последовательностями. elearning.volgmed.ru
2. Создание ампликонов с помощью ПЦР, которые будут использованы как образцы. elearning.volgmed.ru
3. Определение первичной структуры всех фрагментов. elearning.volgmed.ru

Некоторые современные методы секвенирования ДНК и их особенности:

• Пиросеквенирование. genetico.ru Предполагает выполнение ряда химических реакций для регистрации пирофосфата. genetico.ru Возможно определение нуклеотидной последовательности фрагментов размером 300–500 пар оснований. genetico.ru
• Циклическое лигазное секвенирование. genetico.ru В основе метод лигирования, предполагающий формирование химических связей между нуклеотидами с помощью фермента лигазы. genetico.ru Цель — определение нуклеотидной последовательности фрагментов ДНК размером 25–75 пар оснований. genetico.ru
• Ионное полупроводниковое секвенирование. genetico.ru Исследование выполняется с применением специальных микрочипов, которые регистрируют локальное изменение рН при удлинении синтезируемой цепи ДНК-полимеразой на матрице. genetico.ru
• SMRT. genetico.ru Позволяет отказаться от ПЦР при пробоподготовке и даёт возможность наблюдать в реальном времени за ДНК-полимеразой, наращивающей синтезируемую цепь. genetico.ru Длина чтения значительно увеличилась — до 20 000 пар оснований. genetico.ru

Обработка полученной информации позволяет определить и описать отклонения от нормального строения ДНК, сравнить мутации с имеющимися базами данных. genetico.ru