Современные методы секвенирования ДНК работают по общей схеме: 1

1. Создание библиотеки случайных последовательностей ДНК. 1 Их можно будет сшить с общедоступными адаптерными последовательностями. 1
2. Создание ампликонов с помощью ПЦР, которые будут использованы как образцы. 1
3. Определение первичной структуры всех фрагментов. 1

Некоторые современные методы секвенирования ДНК и их особенности:

• Пиросеквенирование. 3 Предполагает выполнение ряда химических реакций для регистрации пирофосфата. 3 Возможно определение нуклеотидной последовательности фрагментов размером 300–500 пар оснований. 3
• Циклическое лигазное секвенирование. 3 В основе метод лигирования, предполагающий формирование химических связей между нуклеотидами с помощью фермента лигазы. 3 Цель — определение нуклеотидной последовательности фрагментов ДНК размером 25–75 пар оснований. 3
• Ионное полупроводниковое секвенирование. 3 Исследование выполняется с применением специальных микрочипов, которые регистрируют локальное изменение рН при удлинении синтезируемой цепи ДНК-полимеразой на матрице. 3
• SMRT. 3 Позволяет отказаться от ПЦР при пробоподготовке и даёт возможность наблюдать в реальном времени за ДНК-полимеразой, наращивающей синтезируемую цепь. 3 Длина чтения значительно увеличилась — до 20 000 пар оснований. 3

Обработка полученной информации позволяет определить и описать отклонения от нормального строения ДНК, сравнить мутации с имеющимися базами данных. 3