Как работает система регистрации результатов проведения ПЦР в амплификаторе нуклеиновых кислот?

Система регистрации результатов проведения ПЦР в амплификаторе нуклеиновых кислот работает на основе измерения флуоресцентного сигнала в каждом цикле амплификации. elearning.volgmed.ru

Амплификатор в режиме реального времени оснащён системой флуоресцентной регистрации, которая позволяет отслеживать накопление продукта в процессе амплификации и получать результат сразу после окончания цикла. millab.ru

Процесс происходит так: флуоресцентная молекула (флуорофор) поглощает энергию света определённой длины волны, а затем повторно излучает свет с большей длиной волны. sesana.ru Если донорный флуорофор поглощает энергию света, он повышает свой энергетический уровень до уровня возбуждённого состояния. sesana.ru Процесс возврата в основное состояние сопровождается выделением энергии в виде флуоресценции, которую и фиксирует фотодетектор амплификатора. sesana.ru

На мониторе подключённого к амплификатору ПК отображается график, который показывает кривую накопления продукта ПЦР. sesana.ru В течение первых циклов идёт наработка продукта, но его количество, оцениваемое по интенсивности флуоресцентного излучения, не превышает базового уровня. sesana.ru Когда продукт начинает синтезироваться по экспоненте, то кривая на графике резко идёт вверх. sesana.ru Интенсивность флуоресценции в экспоненциальной фазе используется для расчёта данных. sesana.ru

Позднее некоторые реактивы начинают ингибировать ПЦР, запасы нуклеотидов для синтеза заканчиваются, а на графике становится видно, как выработка продукта выходит на плато. sesana.ru