Как работает разделение белков в градиенте плотности?

Разделение белков в градиенте плотности работает следующим образом: www.beckman.co.il

1. Формируют градиент плотности. www.beckman.co.il Для этого в центрифужную пробирку последовательно вводят более плотные растворы в нижнюю часть, оставляя резкую границу раздела между слоями различной плотности. www.beckman.co.il
2. Помещают поверх градиента небольшой объём раствора, содержащего белковую смесь. www.beckman.co.il
3. Во время вращения ротора белки проходят через градиент. www.beckman.co.il Они разделяются в соответствии с их коэффициентами осаждения, причём белковые агрегаты осаждаются быстрее, чем отдельные исследуемые белковые молекулы. www.beckman.co.il
4. В состоянии равновесия суммарный эффект гравитационных и выталкивающих сил приводит к накоплению специфических белков в определённой точке пробирки. www.beckman.co.il При этом происходит отделение белков от агрегатов с различными коэффициентами осаждения. www.beckman.co.il

Для создания градиентов плотности растворов чаще всего применяются растворы сахарозы, иногда с фиксированным рН. www.ibmc.msk.ru