Принцип работы спектрофотометра основан на измерении интенсивности света, проходящего через образец, и выявлении характеристик его поглощения. 1

Процесс происходит следующим образом: 1

1. Источник света (например, ксеноновая или галогенная лампа) испускает широкий спектр волн, покрывающий нужный диапазон — ультрафиолетовый (УФ), видимый или инфракрасный (ИК). 1
2. Свет попадает на монохроматор, который выделяет только нужную длину волны. 1 Это позволяет исследовать образец на строго заданных параметрах, избегая помех от ненужных длин волн. 1
3. После фильтрации узкий световой луч направляется на образец, который находится в кювете. 1 Когда свет проходит через образец, часть его поглощается, а часть — проходит дальше. 1
4. Свет, прошедший через образец, поступает на детектор. 1 Он фиксирует интенсивность оставшегося светового луча. 1 Разница между исходной интенсивностью (до прохождения через образец) и его интенсивностью после позволяет вычислить, какая доля была поглощена веществом. 1
5. Сигналы от детектора обрабатываются с помощью встроенной системы анализа данных. 1 Результат измерений представляется в виде спектра — графика, где по оси абсцисс откладываются длины волн, а по оси ординат — интенсивность поглощения. 1

Работа спектрофотометра основана на законе Бугера-Ламберта, который гласит, что количество поглощённого света в образце пропорционально концентрации вещества, через которое проходит свет. 2