Как работает обратная транскрипция в ПЦР?

ПЦР с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР, RT-PCR) применяется, если в качестве искомого генетического материала выступает не ДНК, а РНК вируса. gemotest.ru

Суть процесса: одноцепочечную молекулу РНК превращают в комплементарную ДНК (кДНК) с помощью особого фермента — обратной транскриптазы. ru.ruwiki.ru dna-technology.ru Так РНК превращается в ДНК-молекулу, готовую к дальнейшему копированию с помощью стандартной ПЦР. gemotest.ru

Процесс состоит из двух этапов: ru.ruwiki.ru

1. Реакция первой цепочки. ru.ruwiki.ru ru.wikipedia.org Комплементарная ДНК (cDNA) образуется на матрице мРНК из dNTP ферментом обратной транскриптазой. ru.ruwiki.ru ru.wikipedia.org Компоненты реакции смешиваются с ДНК-праймером и буфером с обратной транскриптазой на один час при 37 °C. ru.ruwiki.ru ru.wikipedia.org
2. Реакция второй цепочки. ru.ruwiki.ru ru.wikipedia.org После того как обратная транскрипция закончена и образована cDNA на матрице мРНК, следующие циклы производятся по стандартной методике ПЦР. ru.ruwiki.ru ru.wikipedia.org

ОТ-ПЦР используется для обнаружения молекул РНК в образце с заранее известным участком последовательности, комплементарным праймеру. ru.ruwiki.ru ru.wikipedia.org