Как работает метод выделения ДНК из слюны?

Метод выделения ДНК из слюны включает несколько шагов: blog.genotek.ru

1. Разрушение мембран клеток и клеточных ядер. blog.genotek.ru Это нужно, чтобы всё содержимое клетки — ДНК, белки, липиды и сахара — вышло в раствор. blog.genotek.ru Для слюны используют лизисный буфер с детергентом SDS. blog.genotek.ru Детергент разрушает мембраны, а буферный компонент раствора поддерживает pH на оптимальном для ДНК уровне. blog.genotek.ru
2. Освобождение ДНК от белков. blog.genotek.ru Вышедшую в раствор ДНК нужно освободить от связанных с ней белков. blog.genotek.ru Одновременно с этим необходимо инактивировать ДНКазы — ферменты, которые атакуют «оголенную» ДНК. blog.genotek.ru За разрушение клеточных белков отвечает ещё один компонент лизисного буфера — протеина К. blog.genotek.ru
3. Отделение ДНК от примесей. blog.genotek.ru Для этого раствор центрифугируют в пробирках с кремниевой мембраной, которая связывается с ДНК и пропускает остальные органические компоненты клетки. blog.genotek.ru Центрифугирование многократно увеличивает скорость фильтрации сквозь мембрану. blog.genotek.ru Мембрану со связанной ДНК несколько раз промывают спиртом — изопропанолом или этанолом. blog.genotek.ru
4. Растворение ДНК в буфере для хранения. blog.genotek.ru Связанную с мембраной ДНК отмывают буфером для элюции (элюцией называют процесс выведения в раствор адсорбированного вещества). blog.genotek.ru Растворенная в буфере ДНК может храниться при −20 °С в течение нескольких лет. blog.genotek.ru

Выделение высококачественной ДНК из слюны — сложная задача из-за присутствия ингибиторов, муцинов и других соединений. ejfs.springeropen.com