Как работает метод Грама при окрашивании бактериальных клеток?

Метод Грама позволяет дифференцировать бактерии по биохимическим свойствам их клеточной стенки. ru.ruwiki.ru ru.wikipedia.org

Процесс окрашивания по Граму включает несколько этапов: moodle.kstu.ru

1. На обезжиренных предметных стеклах готовят два мазка исследуемых микробных культур для сравнения (один грамотрицательный, а другой грамположительный). moodle.kstu.ru
2. Мазки одновременно высушивают и фиксируют в пламени спиртовки. moodle.kstu.ru
3. Затем мазки окрашивают основным красителем, например генциановым фиолетовым. moodle.kstu.ru
4. Препарат не промывают и добавляют раствор Люголя, при этом окраска изменяется от фиолетовой в чёрную. moodle.kstu.ru Это связано с тем, что йод образует с генциановым фиолетовым нерастворимый в воде и плохо растворимый в спирте и ацетоне комплекс. moodle.kstu.ru
5. Спустя 2 минуты раствор сливают с предметного стекла, а мазок обесцвечивают этиловым спиртом (96%) в течение 30 секунд. moodle.kstu.ru
6. Препарат промывают водой и дополнительно окрашивают фуксином в течение 2–3 минут. moodle.kstu.ru
7. По окончании окрашивания предметное стекло берут за конец, держат в наклонном положении и смывают краситель, направляя струю воды на ребро предметного стекла. moodle.kstu.ru Промывают до тех пор, пока стекающая вода не станет бесцветной. moodle.kstu.ru
8. Препарат высушивают на воздухе. moodle.kstu.ru

Грамположительные микроорганизмы окрашиваются в цвет основного красителя (фиолетовый, синий), а грамотрицательные — обесцвечиваются, поэтому они имеют цвет дополнительного красителя — фуксина (красный, розовый). moodle.kstu.ru

Это происходит из-за наличия внешней мембраны, препятствующей проникновению красителя внутрь клетки. ru.ruwiki.ru labtorg.kz