Как работает метод флуоресцентной гибридизации in situ?

Метод флуоресцентной гибридизации in situ (FISH) используют для обнаружения и локализации определённых последовательностей ДНК на хромосомах. www.apollohospitals.com

Процесс включает несколько этапов: www.apollohospitals.com

1. Базовые приготовления. www.apollohospitals.com Собирают образцы тканей, например кровь, костный мозг или биопсии. www.apollohospitals.com Затем образец фиксируют на предметном стекле микроскопа, чтобы сохранить структуру хромосом или клеток. www.apollohospitals.com
2. Денатурация. www.apollohospitals.com ДНК в образце денатурируют при нагревании, в результате чего двухцепочечная ДНК разделяется на одинарные нити. www.apollohospitals.com Это позволяет флуоресцентным зондам связываться с их комплементарными последовательностями. www.apollohospitals.com
3. Гибридизация зонда. www.apollohospitals.com К образцу применяют флуоресцентно меченые зонды, которые представляют собой короткие последовательности нуклеотидов, комплементарные целевой ДНК или РНК. www.apollohospitals.com Эти зонды связываются с соответствующими им генетическими последовательностями. www.apollohospitals.com
4. Промывка и обнаружение. www.apollohospitals.com Образец промывают, чтобы удалить все несвязанные зонды. www.apollohospitals.com Затем предметное стекло исследуют под флуоресцентным микроскопом, который обнаруживает флуоресцентные сигналы, испускаемые связанными зондами. www.apollohospitals.com
5. Визуализация. www.apollohospitals.com Флуоресцентные сигналы выглядят как ярко окрашенные пятна или полосы, что позволяет исследователю идентифицировать определённые генетические последовательности и аномалии на основе их местоположения и интенсивности. www.apollohospitals.com

При наличии в исследуемом образце аберрантных хромосом происходит их связывание с ДНК-пробой, которое при исследовании с помощью флуоресцентного микроскопа определяется как флуоресцентный сигнал (положительный результат FISH-теста). helix.ru При отсутствии аберрантных хромосом несвязанные ДНК-пробы в ходе реакции «отмываются», что при исследовании с помощью флуоресцентного микроскопа определяется как отсутствие флуоресцентного сигнала (отрицательный результат FISH-теста). helix.ru