Линза Барлоу в микроскопе работает следующим образом: она представляет собой вставку в окулярный тубус перед окуляром. 2 В таком положении линза увеличивает эффективное фокусное расстояние объектива, что приводит к общему увеличению микроскопа. 15

В зависимости от используемого увеличения, линза Барлоу может увеличивать или уменьшать увеличение. 15 Например, 2×-линза уменьшает рабочее расстояние вдвое и увеличивает увеличение вдвое, 0,75× (3/4×) — увеличивает рабочее расстояние на 4/3× (1,33×) и уменьшает увеличение на 0,75×, а 0,5× — удваивает рабочее расстояние и вдвое уменьшает увеличение. 5

Также использование линзы Барлоу влечёт за собой уменьшение физического диаметра окулярного тубуса, что приводит к уменьшению диаметра используемого окуляра и, следовательно, — уменьшению его поля зрения (в большинстве случаев). 2