Как работает цифровая ПЦР в реальном времени?

Цифровая ПЦР (цПЦР) позволяет определить абсолютное количество целевых нуклеиновых кислот, присутствующих в образце. 5

Процесс работы включает несколько этапов: 5

1. Разведение и разделение образца. 5 Каждую ячейку реакционной смеси содержат либо одну ДНК-мишень (или всего несколько), либо не содержат их вовсе. 5
2. Проведение ПЦР с флуоресцентным красителем или гидролизными зондами. 5
3. Считывание флуоресцентного сигнала. 5 Долю положительных по амплификации ячеек используют для количественного определения концентрации целевой последовательности. 5

Разделение образцов эффективно концентрирует ДНК-мишени в ячейках. 5 Этот эффект концентрации снижает конкуренцию матриц и позволяет обнаруживать редкие мутации на фоне последовательностей дикого типа. 5

Метод цПЦР подходит для исследований, требующих высокой чувствительности и надёжности, так как позволяет обнаружить даже одну молекулу нуклеиновой кислоты в пробе. 2