Как работает цифровая ПЦР в реальном времени?

Цифровая ПЦР (цПЦР) позволяет определить абсолютное количество целевых нуклеиновых кислот, присутствующих в образце. gosniipp.ru

Процесс работы включает несколько этапов: gosniipp.ru

1. Разведение и разделение образца. gosniipp.ru Каждую ячейку реакционной смеси содержат либо одну ДНК-мишень (или всего несколько), либо не содержат их вовсе. gosniipp.ru
2. Проведение ПЦР с флуоресцентным красителем или гидролизными зондами. gosniipp.ru
3. Считывание флуоресцентного сигнала. gosniipp.ru Долю положительных по амплификации ячеек используют для количественного определения концентрации целевой последовательности. gosniipp.ru

Разделение образцов эффективно концентрирует ДНК-мишени в ячейках. gosniipp.ru Этот эффект концентрации снижает конкуренцию матриц и позволяет обнаруживать редкие мутации на фоне последовательностей дикого типа. gosniipp.ru

Метод цПЦР подходит для исследований, требующих высокой чувствительности и надёжности, так как позволяет обнаружить даже одну молекулу нуклеиновой кислоты в пробе. helicon.ru