Как происходит синтез генов на основе ПЦР для кристаллизации рекомбинантных белков?

Синтез генов на основе ПЦР для кристаллизации рекомбинантных белков включает несколько этапов. bmcbiotechnol.biomedcentral.com

Выделение нужного участка ДНК для амплификации (увеличения количества). helicon.ru Для этого подбирают два различных праймера. helicon.ru Так как синтез на двух цепях ДНК идёт антипараллельно, то есть в разных направлениях, один праймер должен быть комплементарен началу искомого ДНК-фрагмента на первой материнской цепи, а второй — началу того же фрагмента на второй цепи. helicon.ru

Амплификация ограниченного праймерами участка ДНК. helicon.ru Достигается многократным повторением трёх стадий ПЦР. helicon.ru В каждом новом цикле к уже имеющимся ДНК-матрицам добавляются новосинтезированные на предыдущем этапе элонгации. helicon.ru Как правило, для получения необходимого количества ДНК-фрагментов достаточно 25–40 циклов ПЦР. helicon.ru

Получение гомогенных продуктов ДНК после каждого этапа синтеза. bmcbiotechnol.biomedcentral.com Это возможно благодаря тому, что процедура основана на последовательной сборке. bmcbiotechnol.biomedcentral.com

Трансформация продуктов реакции в подходящую клетку-хозяина. bmcbiotechnol.biomedcentral.com

Сверхэкспрессия рекомбинантных белков из синтетических генных конструкций. bmcbiotechnol.biomedcentral.com Затем белки очищают и используют для кристаллизации. bmcbiotechnol.biomedcentral.com

Такой подход к синтезу ДНК специально разработан для быстрой сборки кодирующих областей ДНК для кристаллизации рекомбинантных белков. bmcbiotechnol.biomedcentral.com