Как происходит синтез генов на основе ПЦР для кристаллизации рекомбинантных белков?

Синтез генов на основе ПЦР для кристаллизации рекомбинантных белков включает несколько этапов. 1

Выделение нужного участка ДНК для амплификации (увеличения количества). 4 Для этого подбирают два различных праймера. 4 Так как синтез на двух цепях ДНК идёт антипараллельно, то есть в разных направлениях, один праймер должен быть комплементарен началу искомого ДНК-фрагмента на первой материнской цепи, а второй — началу того же фрагмента на второй цепи. 4

Амплификация ограниченного праймерами участка ДНК. 4 Достигается многократным повторением трёх стадий ПЦР. 4 В каждом новом цикле к уже имеющимся ДНК-матрицам добавляются новосинтезированные на предыдущем этапе элонгации. 4 Как правило, для получения необходимого количества ДНК-фрагментов достаточно 25–40 циклов ПЦР. 4

Получение гомогенных продуктов ДНК после каждого этапа синтеза. 1 Это возможно благодаря тому, что процедура основана на последовательной сборке. 1

Трансформация продуктов реакции в подходящую клетку-хозяина. 1

Сверхэкспрессия рекомбинантных белков из синтетических генных конструкций. 1 Затем белки очищают и используют для кристаллизации. 1

Такой подход к синтезу ДНК специально разработан для быстрой сборки кодирующих областей ДНК для кристаллизации рекомбинантных белков. 1