Окрашивание клеточных стенок бактерий по методу Грама происходит в несколько этапов: 2

1. На фиксированный на предметном стекле мазок наносят кристаллический фиолетовый краситель. 2 Через 10–30 секунд излишки красителя смывают водой. 2
2. На мазок наносят раствор йода на 10–30 секунд. 2 Этот шаг известен как «фиксация красителя». 2 Раствор йода сливают, предметное стекло промывают проточной водой. 2
3. Добавляют обесцвечивающее вещество, часто это смешанный растворитель из этанола и ацетона. 2 Предметное стекло промывают водой в течение 5 секунд. 2
4. На этапе контрастного окрашивания мазок докрашивают основным раствором фуксина в течение 40–60 секунд. 2 Раствор фуксина смывают водой, избыток воды промокают салфеткой, а предметное стекло сушат на воздухе. 2

Бактерии окрашиваются по-разному в зависимости от строения их клеточной стенки. 5 У грамположительных бактерий толстый муреиновый слой, с компонентами которого и связывается фиолетовый краситель. 5 У грамотрицательных бактерий муреиновый слой гораздо тоньше, да ещё и поверх него располагается наружная мембрана. 5 Наружная мембрана мешает окрашиванию и так тонкой клеточной стенки, потому она и не способна связаться с фиолетовым красителем. 5

По завершении окрашивания по Граму грамположительные клетки становятся фиолетовыми, а грамотрицательные — от розового до красного. 2