Биогенез тРНК в эукариотических клетках начинается с транскрипции РНК-полимеразой III в виде пре-тРНК в ядре. 1 РНК-полимераза III распознаёт две высококонсервативные промоторные последовательности внутри генов тРНК: 5'-внутригенную контрольную область (5'-ICR, D-контрольная область или бокс) и 3'-ICR (T-контрольная область или B-бокс). 1

Пре-тРНК претерпевают обширные модификации внутри ядра. 1 Некоторые из них содержат интроны, которые сплайсируются или разрезаются с образованием функциональной молекулы тРНК. 1

Метилирование предшественников тРНК у эукариот осуществляется в ядре, в то время как ферментативные процессы удаления интрона и присоединения триплета ЦЦА происходят, скорее всего, в цитоплазме. 2

Дальнейшая модификация включает присоединение триплета ЦЦА и образование акцепторного участка (на 3'-конце молекулы), к которому присоединяется аминокислота. 2